Лабораторная диагностика туберкулеза

Несмотря на то, что туберкулёз ежегодно поражает многие тысячи людей по всему миру ещё с доисторических времён, даже с современным уровнем медицины своевременное выявление диагноза туберкулёз лёгких не всегда удаётся.

Это обусловлено некоторыми приспособительными особенностями возбудителя и защитными реакциями самого организма, из-за которых начальные стадии заболевания протекают практически незаметно, а первые характерные симптомы появляются только после того, как орган получит значительный ущерб.

Так как любое заболевание намного быстрее лечиться на более ранних этапах, а в случае с туберкулёзом, своевременная диагностика и вовсе может сэкономить если не годы, то месяцы уж точно.

Поэтому в современной медицине предусмотрена принудительная поголовная профилактическая диагностика туберкулёза лёгких и проводится тщательнейшее обследование каждого вновь выявленного больного, в том числе лабораторными методами, для назначения единственно правильной терапии.

Что входит в понятие «лабораторная диагностика»

Лабораторная диагностика туберкулеза является разновидностью клинической, при этом изучает физиологическое состояние больного, его патологии, выявляет наличие заболеваний и проводит оценку по химическому, структурному и клеточному составу всех составляющих организма.

Её задача найти закономерности и пределы колебаний всех исследуемых параметров, а по отклонениям от нормы выявить признаки присутствия микобактерий туберкулёза в организме и определить нанесённый ими ущерб, а также характер течения заболевания.

Лабораторная диагностика туберкулёза чаще всего осуществляется путём проведения следующих мероприятий:

Исследования мочи.
Многообразные анализы крови.
Изучение мокроты.

Проведение лучевой диагностики, позволяющей осмотреть состояние лёгочной ткани, размер поражения и месторасположение очага при помощи рентгена или томографии.

Для профилактического обследования взрослого населения в массовом порядке применяется лучевая диагностика в виде флюорографии – разновидности рентгена, а исследование тканей у взрослых и детей проводится только в случае противопоказаний к облучению или непереносимости туберкулиновых проб.

В случае же обнаружения признаков заражения может быть проведён сразу весь комплекс диагностических мероприятий для получения абсолютно ясной картины.

Общие анализы

Общие анализы – это всем известные клинические исследования мочи и крови, которые показаны при любом подозрении на наличие патологии. Выявить с их помощью туберкулёз не получится, так как основная цель именно обнаружения отклонений, а выяснение их причин будет проводиться уже другими методами. Хотя в некоторых случаях это бывает возможно.

ОАМ при туберкулёзе

Целенаправленно лабораторная диагностика туберкулёза по моче не производится, так как её показатели на начальных стадиях не изменяются, а возбудитель начинает присутствовать только при переходе заболевания в открытую форму, когда и так становиться понятно, что человек болен. Исключение составляет туберкулёз почек и мочевыводящих путей, который может развиться как в виде самостоятельного заболевания, так и быть следствием обострения или вторичного туберкулёза. При этом наблюдаются следующие патологии показателей:

пиурия – наличие в моче гноя;
эритроцитурия – крови;
протеинурия – белка;
лейкоцитурия – лейкоцитов;
а также стойкая кислая реакция пробы;
и, как уже отмечалось выше, присутствие МБТ в период обострения.

ОАК при туберкулёзе

ОАК также не показывает именно туберкулёз, а является маркером для определения поражения организма каким-либо возбудителем. При туберкулёзе могут наблюдаться следующие отклонения:

анемия;
падение количества лейкоцитов при очаговой или инфильтративной форме недуга, которое при фиброзно-кавернозной вообще может достигать 50%;
значительное увеличение зернистости лейкоцитов;
увеличение числа лимфоцитов;
уменьшение эозинофилов и моноцитов, которое прямо пропорционально тяжести заболевания;
резкое увеличение эозинофилов при развитии сепсиса, вызванного микобактериями;
Увеличение СОЭ.

Помимо диагностики наличия патологии, ОАК при туберкулезе используется для контроля терапии, так как хорошо отражает эффективность лечения либо, наоборот, усугубление недуга.

Микробиологические методы диагностики легких

Микробиологические исследования заключаются в непосредственном выявлении наличия патогенного возбудителя в теле человека при помощи образцов его тканей или жидкостей.

Микробиологическая диагностика туберкулёза производится при помощи посева с использованием чаще всего мокроты, промывной воды лёгких или желудка, образцов тканей легких или крови.

При этом практически все они основаны на использовании метода окрашивания Циля-Нельсена.

Окрашивание Циля-Нельсена

При помощи данного метода можно исследовать любые ткани организма на присутствие МБТ, выбор же основных исследуемых материалов обоснован более высокой вероятностью присутствия возбудителя в пробе. Основа метода – это кислотоустойчивость бацилл возбудителя и высокая выносливость к любому воздействию на них. Метод Циля-Нельсена позволяет сделать их видимыми и легко обнаружить при микроскопии:

Сначала производится посев, дабы можно было выявить инфицирование образца даже при маленьком наличии бацилл.
Затем образец окрашивают пигментом при небольшом термическом воздействии, которое оказывают для того, чтобы краска смогла пропитать защитную оболочку.
Далее, окрашенный образец обесцвечивается кислотой, которая не подействует на МБТ.
Производится вторичное окрашивание без термообработки, которое подействует на образец, но не на сами бациллы.

В результате микобактерии будут выделяться на контрастном фоне, а в некоторых случаях их наличие можно будет увидеть даже невооружённым глазом по цвету пробы. Посев и микробиологическая диагностика может осуществляться и другими способами, которые отличаются друг от друга скоростью, точностью и необходимостью в наличии дорогого оборудования.

Метод Левенштейна — Йенсена

Культуральное исследование Левенштейна — Йенсена представляет собой двухмесячный посев на твёрдую питательную среду и определить инфицирование по темпу роста и внешнему виду колоний, культивируемых в особых, подобранных для туберкулёза условиях. Данный метод прост, доступен и эффективен, но он долгий.

ВАСТЕС

Микробиологическая диагностика при помощи специального аппарата ВАСТЕС, позволяющего ускорить посев до 1-2 недель. Суть метода также довольно проста:

Образец пробы помещается в пробирку с питательной средой и кислородозависимым красителем.
В процессе размножения МБТ сжигают кислород в пробирке и флюорохромный краситель начинает ярко светиться под ультрафиолетом.
В прибор встроен датчик, анализирующий это свечение, по скорости его усиления которого ВАСТЕС высчитывает скорость роста бацилл и их изначальное количество.

GeneXpert MTB/RIF

Ещё один аппарат, производящий автоматическую микробиологическую диагностику туберкулёза за очень короткий период.

Его работа основана на генетических методах исследования, при этом GeneXpert MTB/RIF не только выявляет бациллы, но также проводит автоматическую диагностику возбудителя на лекарство устойчивость, что крайне важно при назначении терапии. Единственный минус – не каждая лаборатория может себе позволить такой аппарат.

Другие лабораторные методы

Помимо посева, выявить наличие МБТ в крови пациента можно при помощи всем известных и часто применяемых для профилактической диагностики анализов крови на туберкулез, во время проведения которых распознаётся не сам возбудитель, а результаты его присутствия в организме. К таким методам относятся:

ИФА – иммуноферментный анализ (наличие антител к возбудителю);
полимеразная цепная реакция (ПЦР) – исследование на остатки ДНК бацилл;
интерфероновый тест – выработка лимфоцитами крови из образца антител к микобактериям;
квантифероновый тест – выработка лимфоцитами антител именно к патогенной активной форме МБТ.

Лучевая диагностика

Лучевая диагностика туберкулеза лёгких проводится для визуальной оценки места расположения очагов поражения, их размере и количестве, а также темпах роста.

Данный метод может применяться как для контроля за течением недуга, так для профилактического обследования.

Во втором случае данный метод не очень эффективен, так как позволяет выявить туберкулёз только тогда, когда он начнёт разрушать лёгкие, хотя в оправдание, попутно можно выявить помимо туберкулёза другие патологии, которые встречаются в большом количестве.

В современной медицине методы лучевой диагностики применяются в виде рентгенодиагностики и томографии. Рентгенодиагностика туберкулёза проводится в виде флюорографии или рентгена, на которых будут видны затемненные участки нездоровых тканей.

Томография лёгких при туберкулезе позволяет исследовать поражённый орган в трёхмерном изображении для того, чтобы выявить даже микроскопические очаги. Из всех методов самым современным и востребованным является компьютерная томография, которая проводится даже без использования контрастного вещества и позволяет делать мельчайшие срезы исследуемой ткани.

КТ лёгких при туберкулёзе для профилактики могут себе позволить только зажиточные граждане, но если же заболевание уже диагностировано, то пройти обследование можно бесплатно.

Туберкулёз на КТ выглядит точно также в виде затемнений, но помимо самого очага можно исследовать лимфоузлы и структуру лёгочной ткани, чтобы понять форму заболевания, характер его протекания и уровень негативных последствий.

Источник: http://vlegkih.ru/tuberkulez/laboratornaya-diagnostika-tuberkuleza-legkix.html

Лабораторная диагностика туберкулеза

… лабораторная диагностика занимает ведущее место в выявлении многих инфекционных заболеваний.

Диагностика туберкулеза основывается на данных клинических, гистологических, микробиологических исследований, оценке результатов туберкулиновых проб и тест-терапии.

Из этих методов самым надежным является обнаружение микобактерий туберкулеза (МБТ), остальные же информативны только в комплексе.

Современная микробиологическая диагностика туберкулеза состоит из нескольких основных групп анализов, направленных на: • выявление (обнаружение) возбудителя; • определение лекарственной устойчивости;

• типирование микобактерий туберкулеза.

Бактериоскопические методы. Обнаружение возбудителя начинается с наиболее простых и быстрых бактериоскопических методов: световой микроскопии с окраской по Цилю–Нильсену и люминесцентной микроскопии с окраской флюорохромами.

Преимущество бактериоскопии – в быстроте получения результата, однако возможности ее ограничены из-за низкой чувствительности.

Этот метод является наиболее экономичным и рекомендован Всемирной организацией здравоохранения в качестве основного для выявления заразных больных.

Культуральные исследования. «Золотым стандартом» выявления МБТ признаны культуральные исследования.

В России для посева патологического материала используют яичные среды: Левенштейна–Йенсена, Финна-II, Мордовского и др.

Для повышения процента выделения микобактерий посевы патологического материала проводят на несколько сред, в том числе и на жидкие, что позволяет удовлетворить все культуральные потребности возбудителя. Посевы инкубируют

до 2,5 месяцев, при отсутствии роста к этому времени посев считается отрицательным.

Метод биологической пробы. Наиболее чувствительным способом обнаружения МБТ считается метод биологической пробы – заражение диагностическим материалом высокочувствительных к туберкулезу морских свинок.

Молекулярно-генетическая диагностика. Развитие молекулярной биологии позволило значительно повысить эффективность обнаружения микобактерий.

Базовым методом молекулярно-генетических исследований является полимеразная цепная реакция (ПЦР), направленная на выявление ДНК микобактерий в диагностическом материале.

ПЦР дает экспоненциальную амплификацию специфического участка ДНК возбудителя: 20 циклов ПЦР приводят к увеличению содержания исходной ДНК в 1 миллион раз, что позволяет визуализировать результаты методом электрофореза в агарозном геле.

Роль молекулярной диагностики в клинической практике повышается, поскольку увеличивается число больных со скудным бактериовыделением. Однако при установлении диагноза результаты ПЦР являются дополнительными и должны сопоставляться с данными клинического обследования, рентгенографии, микроскопии мазка, посева и даже ответа на специфическое лечение.

Туберкулинодиагностика. Косвенные методы для определения наличия МБТ в организме больного базируются в основном на выявлении специфических антител.

Исторически первым методом является туберкулинодиагностика – она заключается в выявлении иммунных реакций, развивающихся в коже при введении туберкулина. Из большого количества вариантов туберкулиновых проб в настоящее время широко используется внутрикожная проба Манту.

Методы туберкулинодиагностики сохранили свое диагностическое значение только среди пациентов детского и подросткового возраста.

Вспомогательную роль в диагностике внелегочного туберкулеза играют пробы с подкожным введением туберкулина, когда ориентируются на характерную очаговую реакцию (туберкулез глаз, туберкулез женских половых органов).

Более широкому применению туберкулиновых проб с диагностической целью у взрослых препятствует невозможность в большинстве случаев отличить состояние инфицированности и болезни.

Иммуноферментный анализ.

Существуют методики для определения антител к МБТ в различных биологических субстратах с помощью иммуноферментного анализа.

Главная проблема, возникающая при разработке специфической иммунодиагностики, заключается в получении препаратов антигенов и антител, позволяющих добиться оптимального соотношения чувствительности и специфичности тестов. Сейчас преобладает мнение о целесообразности использования этих методов только для скрининга туберкулеза и отбора пациентов для детального обследования.

Диагностики ex juvantibus (тест-терапия). В случаях, когда указанные методы не позволяют подтвердить активный туберкулез (легких), можно использовать метод диагностики ex juvantibus.

Больным с клиническими симптомами и рентгенологическими изменениями, которые свидетельствуют об активном туберкулезе или сомнительной активности процесса, а также при гиперергической туберкулиновой пробе назначают химиотерапию противотуберкулезными препаратами. В таких случаях через 2 – 3 месяца необходимо повторное рентгенологическое исследование.

При заболевании туберкулезной этиологии отмечается частичное или полное рассасывание воспалительных изменений (это так называемый отсроченный диагноз).

Тест CLINISPOT-TB. Новый лабораторный тест для диагностики туберкулеза CLINISPOT-TB заключается в определении количества Т-лимфоцитов, высвобождающих -интерферон при контакте со специфическими антигенами МБТ. Наличие эффекторных Т-лимфоцитов свидетельствует об инфицировании МБТ.

CLINISPOT-TB обладает высокой чувствительностью, позволяя выявлять единичные Т-лимфоциты и таким образом диагностировать латентную инфекцию, а также инфекцию у лиц со сниженным иммунным ответом.

Высокая специфичность теста достигается использованием антигенов, специфичных для патогенных штаммов MБТ, что приводит к отсутствию ложноположительных результатов у вакцинированных или инфицированных другими микобактериями лиц.

В ходе клинических исследований было показано, что чувствительность теста CLINISPOT-TB при активном туберкулезе достигает 96% даже у пациентов с внелегочной локализацией процесса, в то время как чувствительность кожной пробы составляла 69%.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ

Метод абсолютных концентраций. По приказу Минздравсоцразвития России № 109 от 21 марта 2003 г.

в бактериологических лабораториях используется метод абсолютных концентраций: посев выделенных культур микобактерий на плотную питательную среду с критическими концентрациями противотуберкулезных препаратов.

В случае выявления устойчивости к препаратам первого ряда (рифампицину, изониазиду, пиразинамиду, стрептомицину и этамбутолу) проводят исследование на устойчивость к препаратам резервного ряда (фторхинолонам, амикацину,капреомицину, циклосерину, парааминосалициловой кислоте, этионамиду, протионамиду).

Посев на жидкие питательные среды в системе BACTEC MGIT 960. В крупных противотуберкулезных центрах используют методы определения лекарственной устойчивости МБТ при посеве на жидкие питательные среды в системе BACTEC MGIT 960. Эта система проводит автоматизированный учет роста микобактерий, позволяя сокращать срок анализа до 14 дней.

Разрабатываются и внедряются новые методы оценки лекарственной устойчивости по мутациям в геноме МБТ и на основе микрочиповой технологии.

Работа по изучению молекулярных механизмов резистентности показала наличие у микобактерий генов, мутации в которых определяют развитие устойчивости к различным препаратам: к изониазиду – гены katG, inhA, ahpC/oxyR, kasA, furA и ndh, к рифампицину – rpoB, к стрептомицину – rpsL, к фторхинолонам – gyrA и т.д.

Большие надежды в области определения лекарственной устойчивости микобактерий связаны с развитием микрочиповой технологии. Этот высокочувствительный метод позволяет определять устойчивость микобактерий одновременно к нескольким противотуберкулезным препаратам непосредственно в диагностическом материале в течение 2 дней.

ТИПИРОВАНИЕ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА

Комплекс методов имеется и для типирования микобактерий, в котором используются культуральные, биохимические, биологические, а также молекулярно-генетические методы.

На основе молекулярно-генетического типирования микобактерий интенсивно развивается область молекулярно-эпидемиологических исследований, в которой по генотипу микобактерии выявляются очаги и прослеживаются пути распространения туберкулезной инфекции.

Источник: http://doctorspb.ru/articles.php?article_id=2135

Лабораторные методы исследования при туберкулезе

Перельман М. И., Корякин В. А.

Исследование мокроты. Выявление МБТ в мокроте имеет важное эпидемиологическое и клиническое значение.

Мокроту лучше собирать утром. Предварительно больной должен прополоскать рот, чтобы в мокроте было меньше слюны. При малом количестве мокроты ее собирают в течение суток.

При отсутствии мокроты следует вызвать ее появление раздражающими ингаляциями аэрозоля гипертонического раствора поваренной соли с содой.

Исследуют также промывные воды бронхов, получаемые после введения через трахею 10—12 мл теплого изотонического раствора хлорида натрия.

Исследование мокроты начинают с ее осмотра. У больных туберкулезом легких в мокроте могут быть прожилки или сгустки крови, кусочки обызвествленных камней бронхов — бронхолитов.

При микроскопическом исследовании окрашенных мазков мокроты у больных с деструкцией легочной ткани выявляются эластические волокна. Иногда встречаются так называемые коралловые волокна, которые образуются в результате отложения на эластических волокнах жирных кислот, а также покрытые известью эластические волокна и аморфные известковые частицы.

Для выявления в мокроте МБТ ее исследуют неоднократно, направляя в лабораторию утреннюю порцию не менее 3 дней подряд. В ряде случаев МБТ могут быть обнаружены в мокроте и при отсутствии рентгенологических изменений в легких (в этом случае нельзя исключить и язвенный туберкулез бронха). Проводить исследование мокроты необходимо до начала противотуберкулезной химиотерапии.

Выявление МБТ в патологическом материале осуществляется бактериоскопическим, бактериологическим (культуральным) и биологическим методами.

Кроме мокроты, объектами исследования для обнаружения МБТ могут быть также моча, кал, спинномозговая жидкость, экссудат из полостей, биоптаты различных тканей.

Основным методом выявления МБТ является бактериоскопический. Во многих развивающихся странах он широко применяется не только для диагностики, но и для выявления больных туберкулезом при массовых обследованиях населения.

При прямой бактериоскопии препарат окрашивают по методу Циля — Нильсена: вначале карболовым раствором фуксина, а затем после обесцвечивания 5 % раствором серной кислоты или 3 % раствором солянокислого спирта, докрашивают 0,25 % раствором метиленового синего. Окрашенные препараты микроскопируют в иммерсионной системе. МБТ окрашиваются в красный, а окружающий фон и некислотоустойчивые микроорганизмы — в синий цвет.

Информативность бактериоскопического метода выявления МБТ увеличивается на 14—30 % при применении люминесцентной микроскопии.

Для окраски препарата используют флюорохромы — органические красители, флюоресцирующие при освещении ультрафиолетовыми, фиолетовыми или синими лучами. Такими красителями являются аурамин, родамин С.

Препарат исследуют с помощью люминесцентного микроскопа. МБТ светятся золотисто-желтым цветом на темном фоне.

Для обнаружения бактериоскопическим методом МБТ в препарате необходимо, чтобы в 1 мл мокроты содержалось не менее 100 000 микробных тел. При меньшем числе микобактерий исследование может дать ложноотрицательный результат.

Для увеличения количества МБТ в единице исследуемого объема мокроты используют методы флотации и седиментации, особенно при отрицательных результатах прямой бактериоскопии.

Наибольшее распространение получил метод флотации, основанный на том, что после встряхивания водной суспензии с углеводородом МБТ всплывают вместе с образующейся пеной на поверхность. В качестве углеводорода используют бензин, бензол, ксилол.

Образующееся на поверхности сливкообразное (флотационное) кольцо из частиц углеводорода с микобактериями служит материалом для приготовления препаратов.

При использовании метода флотации число положительных результатов бактериоскопии увеличивается на 10 %.

Бактериологический (культуральный) метод выявления МБТ заключается в посеве мокроты на питательные среды. Перед посевом мокроту обрабатывают с целью подавления роста неспецифической микрофлоры.

Стандартной питательной средой для выращивания МБТ служит твердая яичная среда Левенштейна — Йенсена. Существуют также полужидкие и жидкие питательные среды.

Рост культуры МБТ происходит за 14—90 дней.

Для выделения культуры МБТ достаточно 20—100 микробных клеток в 1 мл мокроты. Получение чистой культуры микобактерий позволяет определить их жизнеспособность, вирулентность, а также чувствительность к лекарственным препаратам.

Нередко определяемые при бактериоскопии микобактерии не растут на питательных средах вследствие утраты способности к размножению под влиянием химиопрепаратов. По данным бактериологического исследования проводится количественная оценка бактериовыделения: скудное — до 50 колоний на среде и обильное — более 50 колоний.

Биологический метод заключается в заражении инфицированной мокротой животных (морских свинок), обладающих высокой чувствительностью к МБТ.

Перед заражением животных мокроту обрабатывают серной кислотой с целью уничтожения неспецифической микрофлоры и центрифугируют.

Осадок (в изотоническом растворе хлорида натрия) вводят свинке подкожно в паховую область, внутрибрюшинно или в яичко. С целью снижения резистентности морской свинки к МБТ ей ежедневно вводят большие дозы кортизона.

Примерно через месяц после заражения у свинки увеличиваются лимфатические узлы и развивается генерализованный туберкулез.

Среди методов выявления МБТ и диагностики туберкулеза биологический метод до последнего времени считался наиболее чувствительным, так как туберкулез у морских свинок может быть вызван при введении мокроты, содержащей менее 5 микробных тел в 1 мл.

В настоящее время доказана возможность потери вирулентности микобактериями туберкулеза. Такие микобактерии жизнеспособны, могут расти на питательных средах, но не вызывают заболевания экспериментальных животных. Поэтому для выявления в патологическом материале МБТ необходимо применять различные методы микробиологического исследования.

Исследование крови. В крови больных туберкулезом обычно отмечаются небольшие изменения. Гипохромная анемия определяется лишь у больных с распространенным процессом и выраженной интоксикацией или при повторяющихся легочных кровотечениях. СОЭ увеличивается в периоды обострения туберкулезного процесса.

Изменение числа лейкоцитов и лейкоцитарной формулы крови происходит главным образом при острых процессах и распаде легочной ткани. Могут наблюдаться лейкоцитоз, увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов, лимфопения, моноцитоз, эозинопения.

Для оценки состояния больного, его неспецифической и специфической реактивности, а также для определения активности туберкулезного процесса и выбора оптимальной лечебной тактики существенное значение имеет определение некоторых биохимических и иммунологических показателей.

У больных туберкулезом, выделяющих большое количество мокроты, с обильным гнойным плевральным экссудатом, амилоидозом почек может иметь место гипопротеинемия в отличие от больных с другими формами туберкулеза.

При остром туберкулезном воспалении уменьшается альбумин-глобулиновый коэффициент, увеличивается содержание в плазме фибриногена и сиаловых кислот, появляется С-реактивный белок.

Для контроля функционального состояния печени и почек в крови определяют содержание аланиновой и аспарагиновой аминотрансфераз, щелочной фосфатазы, билирубина, уровень остаточного азота, мочевины, креатинина, с сывороткой крови ставят коагуляционные пробы — тимоловую, сулемовую. С целью исключения часто сочетающегося с туберкулезом сахарного диабета в крови определяют содержание глюкозы.

Для подтверждения туберкулезной этиологии заболевания используют иммуноферментный метод, основанный на реакции антиген — антитело. При подозрении на иммунодефицит в сыворотке крови определяют содержание иммуноглобулинов. Для диагностики иммунодефицита и контроля за его течением определяют количество В- и Т-лимфоцитов.

При активном туберкулезе все иммунологические реакции положительны, причем их выраженность зависит от фазы туберкулезного процесса. У больных с благоприятным течением туберкулеза наиболее выражена реакция бласттрансформации лимфоцитов, а с прогрессирующим — реакция торможения миграции лейкоцитов в присутствии туберкулина ППД.

При вспышке процесса снижается число Т-розеткообразующих лимфоцитов и повышается число В-розеткообразующих лимфоцитов, одновременно уменьшается содержание G- и А-иммуноглобулинов.

Иммунологические тесты используются для дифференциальной диагностики туберкулеза. Например, при раке и саркоидозе в отличие от туберкулеза отмечается подавление активности Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации с фитогемагглютинином (ФГА), у большинства больных отмечаются отрицательные реакции бласттрансформации лимфоцитов и миграции лейкоцитов с ППД.

Исследование мочи. У больных туберкулезом легких анализ мочи обычно не дает существенной диагностической информации, но иногда выявляются серьезные осложнения основного заболевания. При туберкулезе почек в моче обнаруживают белок, лейкоциты, нередко эритроциты, а также МБТ. При осложнении легочного туберкулеза амилоидозом наблюдаются стойкая протеинурия, микрогематурия.

По выделению с суточной мочой 17-кетостероидов и 17-оксикортикостероидов судят о функциональном состоянии коры надпочечников.

1996

Источник: https://ftiza.su/laboratornyie-metodyi-issledovaniya-pri-tuberkuleze/

Лабораторная диагностика туберкулеза

Для обнаружения возбудителя туберкулеза в патологическом материале в основном пользуются бактериоскопическим и бактериологическим методами. Так как первый наиболее прост и доступен, его преимущественно и используют, несмотря на недостаточную чувствительность.

Бактериологический способ менее доступен и требует гораздо больше времени (от 7 дней до нескольких месяцев), тем не менее он применяется при диагностических исследованиях, поскольку имеет подчас решающее значение в постановке правильного диагноза, например, при дифференциации непатогенных кислотоупорных сапрофитов от туберкулезных микобактерии.

К бактериологическому исследованию обычно прибегают в случаях, когда бактериоскопический метод, включая и накопление микробов с помощью флотации, дает отрицательные результаты.

Бактериологический способ исследования патологического материала распадается на следующие этапы: а) выделение чистой культуры микобактерии туберкулеза; б) дифференциации ее от кислотоупорных сапрофитов; в) биологический метод исследования (определение вирулентности).

Выделение чистой культуры микобактерии туберкулеза осуществляют посевом исследуемого материала на питательные среды. Следует при этом иметь в виду, что мокрота, кал и т. п., наряду с туберкулезными микобактериями, содержат множество других микробов, способных быстро размножаться и подавлять рост возбудителя туберкулеза.

Поэтому туберкулезный материал до бактериологического исследования следует освободить от сопутствующей микрофлоры. Для этого пользуются двумя приемами.

С одной стороны, нестерильный патологический материал предварительно (до посева) обрабатывают 3—15% раствором серной кислоты с целью уничтожения посторонних микробов, а с другой — делают посевы на яичные среды (Петраньяни, Любенау-Гона, Левенштейна), содержащие краски, задерживающие рост посторонних микроорганизмов, но не препятствующие размножению туберкулезных микобактерии. Выделенная на яичной среде культура в дальнейшем может сохраняться на других средах. Посевы держат в термостате при 37—38° и наблюдают за появлением роста в течение 2—3 месяцев, отмечая время появления первых признаков роста. Из выросших колоний делают окрашенные мазки и проверяют кислото- и спиртоустойчивость микробов. Атипичные колонии (пигментные, гладкие, быстро растущие, легко образующие суспензию) отвивают на среды для дальнейшего изучения.

При отсутствии роста в течение 8—10 недель берут соскоб с поверхности среды и микроскопией устанавливают наличие или отсутствие микророста. В положительных случаях приготовляют взвесь из соскоба и инъецируют ее морским свинкам для определения вирулентности.

Выделение чистой культуры из того или иного патологического материала имеет свои особенности главным образом в части предварительной обработки с целью подавления жизнедеятельности сопутствующей микрофлоры. В соответствии с этим приводим описание обработки каждого патологического материала в отдельности.

Мокрота, метод Мазура, обработка гортанного мазка, промывные воды желудка ||| Кал, моча, гной, экссудат, спинномозговая жидкость, обработка кусочков органов, обработка крови, молоко

Общеклиническое исследование мокроты

Техника исследования мокроты

Приготовление препаратов
Фиксация и окраска препаратов на туберкулез по Циль-Нильсену
Исследование мокроты методом флотации

Исследование мочи

Исследование кала

Исследование спинномозговой жидкости

Исследование плеврального экссудата

Диагностика туберкулезных лимфаденитов методом пункции

Дифференциальная диагностика туберкулезных лимфаденитов

Прижизненное цитологическое исследование костного мозга у туберкулезных больных

Цитологическое исследование свищей у костнотуберкулезных больных

Цитологические изменения крови при туберкулезе

Красная кровь

Антибактериальные препараты и гемограмма

Искусственный пневмоторакс и гемограмма
Туберкулин и гемограмма

Бактериологическая диагностика туберкулеза

Ускоренные методы исследования материала от туберкулезных больных

Дифференциация микобактерий туберкулеза от кислотоустойчивых сапрофитов

Биологический метод

Определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза

Схема определения стрептомициноустойчивости

Источник: http://tuberkulez-simptom.ru/laboratornaya-diagnostika-tuberkuleza-24.php

Современная диагностика туберкулеза легких

Заболевание представляет недуг инфекционного характера, вызванный специфическим микобактериальным возбудителем туберкулеза (МБТ).

Микроорганизм способен внедряться в легочные ткани, вызывая длительное заболевание, сопровождающееся интоксикацией и формированием центров воспаления.

В силу инфекционного происхождения и тяжелых последствий выявление туберкулеза легких являет задачу первостепенной важности.

При подозрении на недуг для точной постановки диагноза прибегают к лабораторным методам обследования.

Для выявления МБТ прибегают к бактериоскопии, а также к культуральному и биологическому способу.

Бактериоскопия

Подвергаются образцы мокроты, собранной из нижних отделов дыхательных путей.

Для получения достоверного результата применяют метод флотации, что повышает концентрацию МБТ в единице объема.

Люминесцентная микроскопия служит для окрашивания и распознавания патологического микроорганизма.

Бактериологический способ

Заключается в культивации образцов мокроты на питательных составах. Процесс длится от двух недель до трех месяцев.

Биологический способ

Состоит в инфицировании образцами испытуемых животных, чувствительных к микроорганизму.

Последний способ более надежен ввиду высокой чувствительности испытуемых свинок.

Анализы крови

Значительные изменения формулы крови наблюдаются при глобализации процесса. При стертых формах могут выявляться незначительные отклонения.

Для оценки работы почек и печени проводят тесты на концентрацию билирубина, остатков азота, мочевины, глюкозы. Определяется содержание в крови «В»- и «Т»-лимфоцитов, что позволяет дифференцировать болезнь от иных заболеваний.

Исследования образцов мочи не служит диагностическим показателем, может лишь указывать на сопутствующие осложнения.

Для достижения достоверности лабораторных анализов нужно соблюдать ряд требований, соблюдение которых контролирует медицинская сестра.

Материал следует собирать в утреннее время, до завтрака и приема лекарств, прополоскав полость рта.
При отсутствии мокроты применяют стимулирующие ингаляции, отхаркивающие средства.
Мокроту следует собирать до завтрака и приема лекарств.
Мокрота собирается не менее трех раз подряд, объем каждого утреннего сбора должен быть не менее 3 мл.
Биоматериал следует срочно транспортировать в лабораторию, либо хранить в холодильнике при температуре 4 градуса по Цельсию, но не более двух суток.
Доставку следует выполнять бережно, сохраняя целостность емкостей с материалом.

Медицинская сестра объясняет больному правила сбора мокроты, чтобы в материал попадало отделяемое из нижних отделов дыхательного тракта, а не слюна или слизь из носоглотки.

Медработник должен надеть:

— халат, маску;
— шапку;
— резиновые фартук и перчатки.
к

Собранный материал собирается в емкость с плотной крышкой, емкость метится и отправляется в бикс.

При обследовании детей нужно учитывать, что туберкулез в начальной фазе либо легкой форме может протекать бессимптомно.

Для выявления заболевания в ранних стадиях проводят туберкулиновую диагностику методом вакцинации (БЦЖ), на которую организм инфицированного дает иммунную реакцию.

Другим действенным способом является проба Манту.

Вводится туберкулезный аллерген, через 72 часа проводится оценка реакции.

При положительной пробе (папула более 5 мм.) выполняется обследование на туберкулез.

Действенным диагностическим приемом является Диаскинтест, представляющий аналог методики Манту.

Несвоевременное выявление больных туберкулезом представляет опасность для окружающих и вызывает сложности в лечении.

Существуют три главных способа обнаружения инфицированных МБТ.

Рентгенология.
Бактериологический лабораторный способ.
Туберкулиновая диагностика.

Эффективным методом определения легочного туберкулеза для взрослых является массовая флюорография, которая проводится регулярно — ежегодно либо раз в два года.

Все больные с симптомами, схожими на туберкулез легких, подвергаются флюорографическому обследованию. Проводятся лабораторные анализы крови и мочи, а также микроскопия мокроты.

Флюорография обязательна для работников сферы обслуживания, детских и медицинских учреждений.

Источник: http://moilegkie.com/tuberculosis/sovremennye-diagnostiki-tuberkuleza

Пцр диагностика туберкулеза у детей и взрослых

Современные методы диагностики (пцр, диаскинтест, квантифероновый тест) обладают высокой эффективностью, но на практике исследования не проверены. Туберкулинодиагностика была основой для выявления инфицированных и больных людей.

Способ позволил выявить много больных людей, снизить статистику заболеваемости, смертности.

Посев на микобактерии и микроскопия мокроты по Цилю-Нельсону позволяет достоверно диагностировать инфекцию. Проблема вызывает точное взятие мокроты прямо из пораженного бронха. На фоне туберкулезного процесса поражается значительная часть бронхиального дерева. После бактериального посева возможно проведение пробы на чувствительность возбудителя к антибиотику.

После анализа результатом диагностики фтизиатрам стало ясно, что отсутствие выделения палочки Коха не означает отсутствие инфицирования организма. Возбудитель может определяться после второго, третьего, четвертого взятия материала.

Современные диагностические методы (дст, Квантифероновый тест) выявляют микобактерии при активном течении заболевания. При наличии микобактерий внутри лимфатических узлов, при внелегочных формах заболевания тесты чаще всего отрицательны.

Своевременная диагностика составляет основу предотвращение серьезных осложнений и опасных последствий заболевания.

Современные методы

Заменой классической туберкулинодиагностике является диаскинтест (дст). Согласно последним постановлениям исследование должно заменить стандартную пробу Манту, которая позволила выявить много случаев заболеваемости, инфицированности среди населения.

Суть диаскинтеста, как и туберкулинодиагностики, предполагает подкожное введение белков возбудителей туберкулеза. В ответ на инъекцию вырабатывается реакция гиперчувствительности со специфическими кожными изменениями: покраснение, уплотнение, образование пузырей.

Положительный результат диаскинтеста характерен для пациентов с активным течением заболевания. При инфицировании или повышенной аллергизации исследование будет отрицательным. Отрицательный эффект дст может быть результатом сильного иммунитета, но при инфицировании человека.

При сравнении с Манту диаскинтест является более универсальным и чувствительным способом диагностики туберкулеза. Отсутствие выявления инфицированности требует его применения одновременно с туберкулинодиагностикой.

Несмотря на результаты клинических испытаний дст, ученые утверждают об общей универсальности и чувствительности способа, нельзя считать исследование универсальным диагностическим решением.

Разработан тест академиками НИИ Сеченова. Отсутствие аллергии при использовании диаскинтеста объясняется подкожным введением видоспецифичных туберкулезных белков. После их введения определяется кожная реакция в виде покраснения, уплотнений.

Что такое квантифероновый тест

Квантифероновый тест оценивается после взятия крови больного. Механизм действия процедуры заключается в определении гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами после встречи с микобактериями туберкулеза.

Тесты определяют туберкулезные белки, которые содержат не только бактерии человечьего и бычьего типов. Квантифероновый тест можно использовать также для диагностики микобактериозов, провоцируемых другими микобактериями, которые формируют специфические изменения на рентгенограмме.

Результат теста определяется в нескольких пробирках, что повышает диагностическую чувствительность метода.

Пцр для диагностики детского туберкулеза

Полимеразная цепная реакция – точный, но дорогостоящий метод диагностики туберкулеза. ПЦР проводится после бронхоскопии.

Рационально проведение полимеразной цепной реакции после получения отрицательных результатов. Результаты оцениваются после трехкратного посева мокроты на микобактерии туберкулеза. При самых благоприятных условиях выявление возбудителя свидетельствует об инфицированности. Назначение химиопрофилактики позволяет избежать активного туберкулезного процесса при наличии палочки Коха.

При получении штамма микроорганизма возможен посев на антибиотикочувствительность. Определение антибиотиков, способных уничтожать микроорганизмы, позволяет оценить, какими препаратами проводить лечение инфекции.

ПЦР у детей проводится при отрицательных результатах посева, но при наличии виража туберкулиновой пробы, визуализации рентгенологических признаков инфицирования, выявлении клинических симптомов текущей инфекции.

Полимеразная цепная реакция обеспечивает высокую точность (около 99%). Метод основан на амплификации нуклеиновых кислот. У микобактерий, вирусов и других микроорганизмов существуют уникальные последовательности нуклеотидов. Их диагностика позволяет выявить возбудителя заболевания.

Чувствительность пцр у детей менее низка, чем у взрослых. На практике выявлены следующие особенности полимеразной цепной реакции у ребенка:

Специфичность – 80-100%;
Чувствительность – 25-80%.

Несмотря на высокую достоверность метода, получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулеза у детей. Более рационально использование способа у пациентов с иммунодефицитными состояниями. При диагностике внелегочных форм туберкулезной инфекции.

Ошибки при интерпретации определяется нарушениями при заборе и подготовке материала для исследования.

Причины отрицательного результата пцр при диагностике туберкулеза

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

Хранить материал в стерильных пробирках;
Исключать попадание других бактерий;
При транспортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.

Инновационные методы диагностики

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Современный способ лабораторной диагностики туберкулеза у детей – выявление TAB-TM

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» характеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
Повышение базофилов.

Источник: http://vnormu.ru/diagnostika-tuberkuleza-pcr-detei-vzroslyh.html