Методы выявления мбт при диагностике туберкулеза

Лабораторные методы выявления микобактерий туберкулеза

В.А. Кошечкин, З.А. Иванова

Лабораторная диагностика обеспечивает выполнение главной задачи диагностики и лечения туберкулеза — выявление у больного МБТ.

В лабораторную диагностику на современном этапе входят следующие методики:

  1. сбор и обработка мокроты;
  2. микроскопическая идентификация МБТ в выделяемых субстанциях или тканях;
  3. культивирование;
  4. определение резистентности к препаратам;
  5. серологические исследования;
  6. использование новых молекулярно-биологических методов, включая полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и определение полифиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ).

Сбор мокроты, содержащей МБТ, проводится в специально подготовленном помещении больницы или в амбулаторных условиях. Собранные образцы должны быть немедленно отосланы для микробиологического исследования.

Для этого необходимо использовать специальные контейнеры. Они должны быть прочными, устойчивыми к разрушению, иметь широкую горловину с герметически завинчивающейся пробкой, чтобы предотвратить случайное вытекание из нее содержимого.

Существует два типа контейнеров. Один — распространяемый международной организацией UNICEF (Детский фонд ООН) — является пластмассовой пробиркой с черным основанием, прозрачной крышкой, утилизация которого может быть обеспечена сжиганием. На контейнере (не на крышке) отмечаются данные обследуемого.

Другой тип контейнера сделан из прочного стекла с завинчивающейся крышкой. Такой контейнер может многократно использоваться после дезинфекции, кипячения (10 мин) и полной очистки.

При сборе образцов риск инфицирования очень большой, особенно когда больной выкашливает мокроту. В связи с этим процедуру необходимо проводить как можно дальше от посторонних лиц и в специальном помещении.

Дополнительные процедуры для сбора МБТ
Забор образцов из гортани тампоном. Оператор должен носить маску и закрытый халат.

Язык пациента вытягивается изо рта, одновременно вводится тампон за языковое пространство ближе к гортани. Во время кашля пациента можно собрать часть слизи.

Тампон помещается в закрытый сосуд и направляется в бактериологическую лабораторию.

Промывные воды бронхов. Для своевременной диагностики туберкулеза легких и других органов большое значение имеет раннее распознавание поражения бронхов. Для этой цели в практике применяется исследование промывных вод бронхов.

Методика получения промывных вод не сложна, но надо помнить о противопоказаниях к ее использованию. Людям старческого возраста промывание бронхов следует делать с большой осторожностью.

Процедура противопоказана при бронхиальной астме и явлениях сердечно-легочной недостаточности.

Для получения промывных вод бронхов больному анестезируют дыхательные пути. Гортанным шприцем вводят 15-20 мл физиологического раствора, подогретого до 37 °С. Это усиливает секрецию слизистой бронхов. Откашливая, больной выделяет промывные воды.

Их собирают в стерильную посуду и обрабатывают обычным способом для бактериоскопии и посева на средах для выращивания МБТ. Производится исследование отдельного бронха или целого ветвления.

Метод бактериоскопии промывных вод и особенно их посев способствует увеличению числа находок МБТ на 11-20%.

Промывные воды желудка. Промывные воды желудка нередко исследуются у детей, которые не умеют откашливать мокроту, а также у взрослых при скудном количестве мокроты. Метод не труден и дает довольно большой процент обнаружения МБТ в промывных водах желудка у больных не только легочным туберкулезом, но и туберкулезом других органов (кожи, костей, суставов и др.).

Для получения промывных вод больной утром натощак должен выпить стакан кипяченой воды. Затем желудочным зондом собирают воды желудка в стерильную посуду. После этого воды центрифугируют, мазок делают из гнойных элементов полученного осадка, обрабатывают и красят обычным способом, как мокроту.

Исследование спинно-мозговой жидкости. При подозрении на туберкулезный менингит необходимо в первые дни сделать анализ спинно-мозговой жидкости.

При взятии спинно-мозговой жидкости обращается внимание на степень давления, под которым она вытекает из спинно-мозгового канала. Жидкость, вытекающая непрерывной струей и под большим давлением, свидетельствует о повышенном внутричерепном давлении.

Жидкость, выделяющаяся крупными частыми каплями, говорит о нормальном давлении, а редкими малыми каплями — о пониженном давлении или о препятствии для ее истечения.

Материал для исследования берут в две стерильные пробирки. Одну оставляют на холоде, и через 12-24 ч в ней образуется нежная паутинообразная пленка. Из другой пробирки берут ликвор для биохимических исследований и изучения цитограммы.

Бронхоскопия. В том случае, если другие методы не сумели обеспечить постановку диагноза, применяется сбор материала непосредственно из бронхов, через бронхоскоп. Биопсия выстилающих бронхи тканей может иногда содержать типичные для туберкулеза изменения, выявляемые при гистологическом исследовании.

Плевральная жидкость. В плевральной жидкости МБТ могут быть выявлены с помощью флотации, но обычно обнаруживаются только в культуре. Чем большее количество жидкости используется для культурального исследования, тем вероятней положительный результат.

Биопсия плевры. Биопсия плевры может быть полезна в тех случаях, когда имеется плевральный выпот. Для ее проведения необходимы обученный персонал, средства для проведения гистологического исследования, специальная биопсийная игла.

Биопсия легкого. Биопсия легкого должна выполняться хирургом в стационарных условиях. Диагноз может быть сделан на основе гистологического исследования или обнаружения МБТ в секционном материале.

Микроскопия мокроты
Уже более 100 лет существует самый простой и быстрый метод выявления кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) — микроскопия мазка. КУМ — это микобактерии, способные оставаться окрашенными даже после обработки кислотными растворами. Они могут быть выявлены с помощью микроскопа в окрашенных образцах мокроты.

Микобактерии отличаются от других микроорганизмов характерным составом своей клеточной стенки, состоящей из миколовых кислот. Кислоты благодаря своим сорбционным свойствам обеспечивают способность окрашиваться по методикам, выявляющим КУМ.

Резистентность к стандартным методам окрашивания и способность МБТ сохранять раннее окрашивание является следствием высокого содержания липидов во внешней оболочке клетки. Вообще грамположительные бактерии в своем составе имеют приблизительно 5% липидов или воска, грамотрицательные организмы — около 20% и МБТ – примерно 60%.

Бактериоскопия мокроты или другого отделяемого проводится «простым» методом и методом флотации.
При простом методе мазки приготавливают из комочков мокроты или капель жидкого вещества (экссудата, промывных вод и др.). Материал помещают между двумя предметными стеклами. Один из мазков окрашивают по Граму на общую флору, другой — на туберкулезные микобактерии.

Основным методом окрашивания является карбол-фуксиновый (метод Циля-Нильсена). Главный принцип этого метода — в способности наружной оболочки МБТ адсорбировать карбол-фуксин.

Поглощая красный карбол-фуксин, наружная мембрана МБТ настолько прочно связывает краску, что ее нельзя удалить обработкой серной кислотой или солянокислым спиртом. Затем образец обрабатывается метиленовым синим.

При эмерсионной микроскопии МБТ появляются в виде красных палочек на синем фоне.

Начиная с 1989 г., в современных лабораториях флюоресцентная микроскопия в значительной степени вытеснила старые методы, основанные на кислотоустойчивости микобактерий.

Этот метод базируется на тех же свойствах МБТ, связанных со способностью наружной мембраны МБТ, богатой липидами, удерживать соответствующий краситель, в данном случае — аурамин-родамин. МБТ, поглощая это вещество, одновременно устойчивы к обесцвечиванию солянокислым спиртом.

При этом МБТ, окрашенные аурамин-родамином, флюоресцируют под воздействием ультрафиолета или других световых спектров, выделенных соответствующими фильтрами. Под воздействием ультрафиолета МБТ проявляются как ярко-желтые палочки на черном фоне.

Подготовка образца для культурального исследования
При поступлении в современную лабораторию диагностического материала с возможным содержанием МБТ проводятся следующие диагностические манипуляции:

  • 1. Обработка материала миколитическими разжижающими веществами с целью удаления белковых масс.
  • 2. Деконтаминация образца для удаления сопутствующей бактериальной флоры.
  • 3. Встряхивание смеси и ее отстаивание.
  • 4. Холодное центрифугирование.
  • 5. Содержимое центрифужной пробирки используется для микроскопии посева на:
  • 5.1. плотную яичную среду (Левенштейна-Йенсена или Финна III);
  • 5.2. агаровые среды (7Н10 и 7Н11);
  • 5.3. автоматизированную систему бульонного культивирования (МВ/ВасТ или ВАСТЕС MGIT 960).

Молекулярно-генетические методы диагностики МБТ
Расшифровка генома МБТ открыла неограниченные перспективы в разработке генетико-молекулярных тестов, в том числе в изучении и выявлении МБТ и диагностике в организме человека.

Классические методы, применяемые для обнаружения в организме микобактерий туберкулеза, такие, как бактериоскопия, культуральный, иммуноферментный, цитологический, весьма эффективны, но отличаются или недостаточной чувствительностью, или длительностью выявления МБТ. Развитие и совершенствование молекулярно-диагностических методов открыло новые перспективы для быстрого выявления микобактерий в клинических образцах.

Наибольшее распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Этот метод основан на амплификации особых фрагментов бациллярной ДНК, которая обнаруживается в диагностических образцах. Тест предназначен для выявления МБТ в мокроте или идентификации разновидности бактерий, которые произрастают в культуральной среде.

Реакция ПЦР позволяет проводить идентификацию МБТ в диагностическом материале за 5-6 ч (включая обработку материала) и обладает высокой специфичностью и чувствительностью (в диапазоне от 1-10 клеток в образце).

Источник: https://ftiza.su/laboratornyie-metodyi-vyiyavleniya-mikobakteriy-tuberkuleza/

Микобактерии туберкулеза: профилактика Mycobactérium tuberculósis

18.10.2017

Микобактерии туберкулеза (от лат. «Mycobactérium tuberculósis») – это опасные для здоровья микроорганизмы, которые являются возбудителем развития туберкулеза как у человека, так и у животных.

Первая часть латинского названия данной бактерии «Mycobactérium» имеет приставку «myco-», которая переводится как «гриб» или «воск», и корень «bacterium» — «палочка», «прутик».

Данное определение раскрывает форму и свойства описываемого возбудителя.

Он представляет собой неподвижные вытянутые палочковидные клетки или цепочки с прочными воскоподобными клеточными стенками. Mycobactérium tuberculósis (МБТ) еще известны под названием «палочка Коха».

Такое имя бацилла получила в честь ученого-микробиолога Роберта Коха, который обнаружил ее еще в 1882 году.

В микробиологии МБТ входят в семейство бактерий «Micobacteriacae», относятся к роду «Micobacterium», и состоят в комплексе с другими видами микроорганизмов, вызывающих туберкулез (от лат. «Mycobacterium tuberculosis complex»).

Такими типами бацилл являются M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti, M. caprae, M. pinnipedii. Например, M.bovis возбуждает вирус у быков, свиней, собак, кошек.

Читайте также:  Лечение коклюша у детей антибиотиками

Этот микроб способен спровоцировать заболевание и у человека (5% случаев, в основном внелегочные формы туберкулеза у жителей сельской местности). M. africanum пробуждает туберкулез у людей из Африканских стран (около 3% случаев).

В отличие от них, Mycobactérium tuberculósis (M. tuberculosis) вызывает возникновение болезни у взрослых и детей в более чем 90% случаев, поэтому данный микроорганизм особенно опасен для человека.

Кроме этого, ученые установили, что МБТ также разделяются на определенные культуры (семейства, штаммы), имеющие высокую способность заражать организм, в котором они находятся.

Характеристика возбудителя туберкулеза

Описываемые вредоносные бактерии обладают высокими защитными свойствами, поэтому нейтрализовать их самостоятельно или с помощью одного лекарственного средства невозможно.

Клетка M. tuberculosis состоит из:

  1. защитной мембраны, обеспечивающей целостность клетки;
  2. цитоплазмы, отвечающей за размножение бактерии;
  3. ядерной субстанции, наделенной одной клеткой ДНК;
  4. прочной клеточной стенки, служащей барьером для проникновения внутрь антибиотиков и других лекарственных средств.

Чтобы понимать, как проводить профилактику и лечение МБТ, важно знать о свойствах данного болезнетворного микроорганизма. Его особенностями являются:

  • распространение вируса происходит воздушно-капельным, контактным, бытовым путями или через кровь человека или животного, а также через инфицированное молоко крупного рогатого скота;
  • 37-38°С – благоприятная температура, способствующая активному росту клеток МБТ;
  • палочку Коха отличает длительный инкубационный период (около 30-50 дней): бацилла размножается очень медленно (от 12 до 24 часов) путем деления одной клетки на две дочерние. Если выявить заболевание на этой стадии, тогда микроб можно уничтожить окончательно;
  • обнаружить болезнетворный вирус легких на ранних этапах заболевания можно при помощи флюорографии, рентгена. Поэтому, чтобы вовремя пресечь признаки туберкулеза важно проходить данное обследование каждый год;
  • микобактерии способны провоцировать болезнь не только в легких, но и в почках, печени, дыхательных органах, сердце, суставах, костях, лимфатических узлах, коже;
  • подходящим местом для активного размножения МБТ является организм со слабым иммунитетом. Если человек злоупотребляет алкоголем, наркотиками, носитель ВИЧ или имеет вредные привычки (курение), тогда туберкулез быстро распространится;
  • палочка Коха устойчива к внешней среде. Например, в темноте, при t 23°C и влажности данный микроб живет около 7-ми лет, в замороженном состоянии – 30 лет, воде — 5 месяцев, на бытовых предметах – до 5-ти месяцев, в человеческом теле – десятки лет (пассивное состояние), почве – 6 месяцев, пыли – около 2-х месяцев, продуктах – до 1-го года, инфицированном помещении – до 8-ми месяцев;
  • вредоносные микробы могут приобретать L-форму. Эта пассивная форма M. tuberculosis долгое время живет в организме, не вызывая в нем вирусов. При благоприятных условиях данные микроорганизмы способны снова активизировать процесс развития туберкулеза;
  • МБТ могут приспосабливаться к новым условиям (мутировать) и проявлять резистентность (устойчивость) к противотуберкулезным препаратам (даже к нескольким антибиотикам одновременно). Поэтому для определения эффективного метода лечения врачи-фтизиатры должны не только выявить вирус в организме больного, но и исследовать лекарственную устойчивость микобактерий туберкулеза;
  • МБТ устойчивы к дезинфицирующим средствам (кислоте, щелочам, спирту), антисептическим средствам, ацетону.

Несмотря на целый ряд опасных признаков и свойств Mycobactérium tuberculósis, их можно уничтожить следующими способами:

  1. под воздействием прямых солнечных лучей микобактерии погибают в течение полутора часов;
  2. при свечении ультрафиолета МБТ исчезают через 2-3 минуты;
  3. после кипячения влажной мокроты, содержащей M. tuberculosis, бациллы погибают через 5 минут;
  4. после обработки помещения или предметов средствами, содержащими активный хлор, микробы нейтрализуются через 5 часов.

Благодаря применению данных способов защиты, можно обезопасить себя и других от воздействия опасного микроба МБТ.

Формы «поведения» Mycobactérium tuberculósis

После проникновения в человеческий организм палочка Коха может либо бездействовать (если ее носитель имеет крепкий иммунитет и ничто не провоцирует ее рост), либо активно размножаться (при ослабленной иммунитете).

Если организм не может противостоять проникшим мбт, тогда они начинают развиваться и провоцируют активную форму туберкулеза.

Симптомы наиболее распространенной, закрытой формы туберкулеза, выявить трудно, потому что носитель данного вируса может не ощущать значительных ухудшений здоровья.

Это может быть хроническая усталость и признаки простуды. В связи с этим диагностика заболевания на раннем этапе остается проблемой.

После того как M. tuberculosis прошла инкубационный период и стала образовывать колонии, закрытая форма туберкулеза переходит в открытый тип заболевания.

Носитель этой болезни представляет опасность для окружающих, так как распространяет палочку Коха, и требует стационарного лечения в тубдиспансере.

Симптомами такого состояния являются: сильный кашель с выделением мокроты, отхаркивание крови, боль в груди, одышка, температура около 37,5°С, повышенное потоотделение, озноб, усталость, слабость, бессонница, быстрая утомляемость.

Диагностика МБТ

В наше время существуют следующие методы выявления микобактерий туберкулеза:

  • клинический анализ крови – если палочка Коха прогрессирует, то данный тест покажет повышенный уровень лейкоцитов;
  • биохимический анализ крови – с его помощью выявляется альбумин – глобулиновый коэффициент, уровень которого при остром туберкулезе ниже нормы. Биохимический анализ также покажет содержание ангиотензин – конвертирующего фермента в крови, активность которого растет при фиброзных изменениях в легких;
  • исследование мокроты – мокрота носителя палочки Коха может содержать гной и примеси крови (открытая форма болезни). Данный анализ установит количество белка в мокроте (большое количество белка указывает на заболевание), определит бациллы M. tuberculosis и другие вещества (холестерин, соли кальция, эластичные волокна). Эти суммарные данные указывают на распад легкого;
  • микробиологическая диагностика – для обнаружения МБТ у пациента берут мокроту и помещают ее в стерильную емкость. Затем работники лаборатории наблюдают характер роста бактерий, их резистентность (устойчивость) к антибиотикам и другим препаратам. Микробиологический анализ может производиться в течение 20-90 дней;
  • рентген – благодаря этому основному методу определения МБТ можно наглядно увидеть присутствие микобактерий в легких человека, разницу между пневмонией и туберкулезом, определить этап распространения вируса в легких;
  • проба Манту – разновидность туберкулиновой пробы, производимая путем введения под кожу туберкулина. Если диаметр папулы через 2-3 дня после введения вещества составляет более 10 мм, тогда пациент находится в группе риска или заражен туберкулезом;
  • накожная проба Пирке – данный анализ проводится путем нанесения обработанным туберкулином скарификатором царапины на кожу пациента в области предплечья. Градуированную пробу Пирке применяют для выявления M. tuberculosis у детей и подростков. По результатам анализа, если через 2-3 суток у пациента наблюдается папула шириной от 4 мм и более, тогда есть вероятность заражения палочкой Коха.

В случае если при помощи вышеуказанных методов обнаружить МБТ не удалось, тогда необходимо провести дополнительные исследования такими способами:

  • компьютерная томография – благодаря этому методу исследования можно выявить место нахождения микроба Mycobactérium tuberculósis, изображение поврежденного органа и установить заболевание;
  • серологические, иммунологические исследования крови и мокроты:
  1. ИФА – иммуноферментный анализ крови. При помощи этого теста можно выявить антитела к микобактериям туберкулеза, которые указывают на заражение пациента МБТ;
  2. РПГА – помогает определить активную внелегочную форму заболевания, установить тип вредоносных микобактерий, а также подтвердить правильность поставленного диагноза;
  3. квантифероновый тест – высокая точность этого исследования крови (до 99%) ясно укажет на присутствие МБТ. Результат теста можно узнать через несколько часов.
  • биопсия – данный анализ производится путем взятия пункции из зараженного органа (легкого, плевры, лимфатических узлов) для ее дальнейшего исследования. Результат анализа точен в 80-90% случаев;
  • бронхоскопия – этот прием проводится при наличии симптомов туберкулеза бронхов. Такой метод выявляет изменения в слизистой оболочке крупных бронхов, их сужение и наличие отверстий в бронхах.

Кроме вышеуказанных есть и другие способы исследования палочки Коха, например, анализ мочи (при туберкулезе мочевыводящих путей и почек, костей), люминесцентная микроскопия, выявляющая МБТ при небольшом их количестве и др.

Лечение и профилактика

Современная медицина предоставляет различные методы лечения палочки Коха, направленные на ее уничтожение.

Борьба с возбудителем туберкулеза включает в себя:

  1. лечение антибиотиками или противотуберкулезная химиотерапия – состоит в назначении врачом-фтизиатром комплекса антибиотиков, основная фаза лечения которыми происходит в условиях стационара (до трех месяцев) и под надзором специалиста. Если пациент не будет соблюдать порядок приема лекарств или они назначены неверно, тогда разовьется лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза в форме млу (множественной лекарственной устойчивости) или шлу (широкой лекарственной устойчивости), когда микобактерии приспособятся к препаратам и лечение станет неэффективным;
  2. комплексное питание больного – назначенная фтизиатром индивидуальная диета пациента играет важную роль в восстановлении нарушенных функций организма. В режим питания обязательно входят белки, жиры, углеводы;
  3. санаторно-курортное оздоровление – насыщение кислородом легких пресекает рост и развитие вредоносных микобактерий, поэтому отдых в горной местности является важной составляющей лечения вируса;
  4. хирургические методы – при остром туберкулезе у пациента может быть удалено легкое или его часть. Цель такого лечения – нейтрализовать очаг поражения, угрожающий жизни человека. Для полного выздоровления больного необходимо использовать данный метод вместе с другими способами терапии.
Читайте также:  Выявление туберкулеза посредством квантиферонового теста

Профилактика заражения палочкой Коха включает в себя:

  • БЦЖ – вакцинация ослабленным штаммом БЦЖ проводится с целью развития иммунитета против МБТ в организме человека. Такая прививка делается в первые дни жизни новорожденного, затем повторяется в 7 и 14 лет. Благодаря данной вакцине риск заражения вирусом снижается, а в случае инфицирования болезнь проходит в легкой степени;
  • флюорография – такое обследование необходимо производить ежегодно, так как наличие M. tuberculosis сложно выявить на ранних этапах другим путем (отсутствие симптомов у больного);
  • лечебная профилактика – употребление препаратов, предупреждающих размножение микобактерий в организме человека, имевшего контакт с больным туберкулезом;
  • улучшение жилищных условий – если оздоровить окружающую среду, тогда можно свести на нет присутствие вредоносных бацилл;
  • отказ от вредных привычек (алкоголизм, курение);
  • ведение здорового образа жизни.

Если использовать все необходимые способы защиты, а также соблюдать режим лечения (в случае инфицирования МБТ), то вполне возможно предупредить развитие туберкулеза или полностью излечиться от возбудителей заболевания Mycobactérium tuberculósis.

Что такое микобактерии туберкулеза и какие виды существуют Ссылка на основную публикацию

Источник: https://tuberkulezkin.ru/info/mikobakterii-tuberkuleza.html

База знаний: Серологическая диагностика туберкулеза методом

Универсальный альтернативный вариант иммунологического исследования in vitro диагностики туберкулезного процесса путем количественного определения мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИФН-γ в ответ на присутствие белков CFP-10 и ESAT-6 M. tuberculosis.

Иммунологический тест на туберкулез

Testing for tuberculosis infection

Прямая оценка функции T-клеток энзим-связывающий иммуноспотингом (ELISPOT).

Зарегистрирован в РФ в 2012 г. (рег. УД. № ФСЗ 2012/648).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Взятие крови для анализа проводится утром, натощак (не принимать пищу за 2 часа до исследования).
  • Проведение исследования не рекомендуется на фоне выраженных симптомов простудного заболевания (катаральных явлений, субфебрилитета и др.).
  • Оптимальные сроки: через 1 месяц после проведения реакции Манту и/или «Диаскинтеста».
  • Перед сдачей крови необходимо сообщить регистратору о наличии хронических заболеваний и принимаемых лекарственных препаратах.

Общая информация об исследовании

Возбудителем туберкулёза является микобактерия туберкулеза (МБТ, палочка Коха, Mycobacterium tuberculosis) – высокоустойчивый микроорганизм.

В настоящее время описано около 150 видов микобактерий, но клинически значимыми признаны М. tuberculosis (более 90% всех случаев туберкулезной инфекции), М. bovis (5%) и М.

africanum (около 3% – главным образом среди населения стран тропической Африки).

Источником инфекции являются больные люди и животные. Наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудитель проникает в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или через поврежденную кожу.

Попадая в окружающую среду, возбудитель способен длительно сохраняться: в высохшей мокроте они выживают до 10 месяцев, на предметах, окружающих больного (белье, книги), – более 3 месяцев, в воде – более года, в почве – до 6 месяцев.

В настоящее время описаны следующие варианты развития ситуации после проникновения МБТ в организм человека [1]

  • полная элиминация (удаление) возбудителя из организма;
  • развитие первичного туберкулеза (при быстром росте и размножении МБТ);
  • инфицирование, или «латентная туберкулезная инфекция» (ЛТИ), [2] – состояние стойкого иммунного ответа на антигены МБТ при отсутствии клинических проявлений активной формы туберкулеза.

Присутствующий в организме возбудитель способен не только длительно бессимптомно персистировать в организме, но при определенных обстоятельствах (интенсивное размножение МБТ на фоне малоэффективного иммунитета и т.д.) реактивироваться и вызвать развитие заболевания.

В настоящее время установлено, что с момента инфицирования МБТ в течение первого года заболевание развивается у 5% инфицированных людей, в течение всей оставшейся жизни туберкулез развивается еще у 5%, то есть пожизненный риск заболевания туберкулезом среди инфицированных составляет 10%.

Вместе с тем наличие различных факторов может способствовать повышению риска развития локального туберкулеза: так, при ВИЧ-инфицировании ежегодный риск заболевания туберкулезом на фоне ЛТИ составляет 10%, а пожизненный риск – 50%.

Диагностика туберкулеза является комплексной и включает, согласно регламентирующим документам, [3] аллергические внутрикожные пробы (реакция Манту и «Диаскинтест»), инструментальное обследование (ФЛГ, рентген) и лабораторные – направленные как на выявление и идентификацию возбудителя с определением спектра его чувствительности к препаратам этиотропной терапии, так и на изучение выраженности иммунологической реакции на патоген.

Одним из современных и высокоинформативных методов определения специфической иммунной реакции на МБТ, особенно при отсутствии или минимальных клинико-инструментальных признаках инфекции и сомнительных результатах общепринятых методов лабораторной диагностики туберкулеза, является тест T-SPOT.

Исследование иммунного Т-клеточно-опосредованного ответа: количественное определение в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Эти белки входят в состав клинически значимых МБТ (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum) и отсутствуют у бактерий, используемых при производстве вакцины БЦЖ и у непатогенных для человека микобактерий.

  • Высокая специфичность и чувствительность метода (87-97%);
  • Безопасность, отсутствие побочных реакций;
  • Отсутствие ложноположительных результатов;
  • Результат исследования не зависит от наличия вакцинации БЦЖ;
  • Не имеет противопоказаний и ограничений по времени проведения;
  • Позволяет диагностировать внелегочные формы туберкулеза;
  • Позволяет диагностировать инфекцию у пациентов с ВИЧ и низкими показателями уровня CD4 [4]

Для чего используется исследование?

  • Диагностика туберкулезной инфекции

Когда назначается исследование?

  • Пациентам, у которых в связи с основным заболеванием (кожно-аллергические заболевания, эпилепсия, хронические заболевания в стадии обострения и др.) затруднено проведение внутрикожных тестов;
  • При наличии в анамнезе пациента токсико-аллергических реакций на туберкулин;
  • Детям, привитым БЦЖ, у которых выявлена ложноположительная реакция Манту – до проведения инструментального обследования легких [5] ;
  • По эпидемиологическим показаниям – пациентам, прибывшим из стран с высоким уровнем заболеваемости туберкулезом (Африка, Азия) и/или находившимся в контакте с диагностированным заболеванием;
  • Пациентам с аутоиммунными и др. заболеваниями (силикоз), ведущими к снижению системного иммунитета;
  • Пациентам, получающим системное лечение глюкокортикоидами или иммуносупрессивную терапию;
  • Онкологическим пациентам, получающим лучевую и химиотерапию;
  • Пациентам на диализе или готовящимся к трансплантации органов или переливанию крови;
  • ВИЧ-инфицированным, особенно со снижением количества СD4-клеток;
  • При подозрении на внелегочные формы туберкулеза.

[1] Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации МЗ РФ, М. 2017.

[2]Руководство по ведению пациентов с латентной туберкулезной инфекцией. ВОЗ. Женева. 2015. 40 с.

[3] Приказ МЗ РФ России от 21.03.2003 года N 109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».

[4] Official American Thoracic Society/Infectious Diseases Society of America/Centers for Disease Control and Prevention Clinical Practice Guidelines: Diagnosis of Tuberculosis in Adults and Children David M. Lewinsohn, Michael K. Leonard, Philip A. LoBue et al. Clin Infect Dis (2017) 64 (2): 111-115. DOI: https://doi.org/10.1093/cid/ciw778.

[5] Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации МЗ РФ, М. 2017.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • Исследование позволяет провести косвенную диагностику наличия в организме возбудителя туберкулеза по интенсивности иммунологической реакции, но не дает возможность дифференцировать форму заболевания.
  • Трактовку результатов исследования необходимо проводить только в комплексе с эпидемиологическими и клинико-инструментальными данными обследования пациента.

Отрицательный результат исследования не гарантирует отсутствия инфицирования. У пациентов, находившихся в контакте с инфицированными МБТ, результаты исследования могут быть отрицательными. Рекомендуется проведение повторного исследования через 6 недель после контакта либо при появлении клинических признаков или симптомов, свидетельствующих о возможном заражении.

Положительный результат исследования не свидетельствует об активной форме туберкулеза. Для подтверждения диагноза необходимо проведение других исследований, включая культуральные исследования мокроты, ПЦР, рентгенографическое исследование грудной клетки и др.

  • Важно помнить, что Т-SPOT является способом количественной диагностики наличия в организме туберкулеза, но не дает возможности отличить активную форму туберкулеза от латентной.
  • Тест имеет особое значение в диагностике туберкулеза у носителей ВИЧ. Вирус иммунодефицита поражает как раз те клетки, которые используются для диагностики в любом из IGRA-тестов, к которым относится и T-SPOT, т.е. клетки CD4. В ходе исследований обнаружилось, что даже на поздних стадиях развития ВИЧ, когда количество лимфоцитов CD4 уже не превышает 100 на мм 3. выявляемость туберкулеза при помощи Т-SPOT остается очень высокой.

Кто назначает исследование?

Фтизиатр, терапевт, врач общей практики.

  • Mazurek GH, Jereb J, Vernon A, LoBue P, Goldberg S, Castro K; IGRA Expert Committee; Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Updated guidelines for using Interferon Gamma Release Assays to detect Mycobacterium tuberculosis infection — United States, 2010. MMWR Recomm Rep. 2010 Jun 25;59(RR-5):1-25.
  • Anochie PI, Onyeneke EC, Ogu AC, Onyeozirila AC, Aluru S, Onyejepu N, Zhang J, Efere L, Adetunji MA, Sánchez JG. Recent advances in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Germs. 2012 Sep 1;2(3):110-120. Review.
  • Diel R, Goletti D, Ferrara G, Bothamley G, Cirillo D, Kampmann B, Lange C, Losi M, Markova R, Migliori GB, Nienhaus A, Ruhwald M, Wagner D, Zellweger JP, Huitric E, Sandgren A, Manissero D. Interferon-γ release assays for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection: a systematic review and meta-analysis.Eur Respir J. 2011 Jan;37(1):88-99.
Читайте также:  Ограничения после проведения пробы манту

Источники: http://www.helix.ru/kb/item/07-165

Источник: http://1lustiness.ru/zhenskie-bolezni/kategoriya/77836-baza-znanij-serologicheskaya-diagnostika-tuberkuleza-metodom

Методы выявления мбт при диагностике туберкулеза

Микобактерии туберкулеза – МБТ открыты более 30 лет назад, однако до сих пор продолжается их изучение, что связано с высокой скоростью развития туберкулеза в обществе при инфицировании хотя бы одного человека.

Эти микроорганизмы относят к семейству Лучистых грибов (Актиномицеты). Представляют собой различного размера палочки, способные к размножению путем простого деления или почкования. Они неподвижны и не способны к образованию спор. Обладают хорошей устойчивостью к различным факторам окружающей среды. Чаще всего их называют палочками Коха в честь первооткрывателя.

Палочки Коха являются грамположительными бактериями, что представляет собой их способность окрашиваться красным цветом при воздействии на них фуксина. Такой метод называется окраской по Цилю-Нильсену. Эта их особенность лежит в основе всех микроскопических способов выявления МБТ.

Микобактерий туберкулеза на данный момент известно множество видов. Наибольший интерес представляют микроорганизмы, опасные для человека и способные вызывать инфекционные заболевания.

К ним относится 2 вида:

  • Mycobacterii tuberculosis-
  • Mycobacterii africanum.

Палочки Коха обладают повышенной жизнеспособностью, поэтому лечение туберкулеза может длиться месяцами с последующим ежегодным контролем больного. Обусловлено это способностью их к персистированию и реверсии.

То есть микобактерии туберкулеза под действием лекарственных препаратов или агрессивных условий окружающей среды преобразуются в промежуточные, более устойчивые формы. Из такого вида они через определенное время возвращаются к исходному состоянию – после прекращения внешнего воздействия.

Важным для диагностики является химический состав возбудителя. Он хорошо изучен. Основу составляет вода и специальные белки (туберкулопротеины), которые являются чужеродными для человеческого организма. На этом построено массовое выявление туберкулеза на ранних этапах для любых возрастных групп – туберкулинодиагностика.

Свойствами МБТ являются:

  • высокая степень патогенности (способность вызывать развитие заболевания за счет корд-фактора);
  • склонность к массовому заражению в коллективах, особенно детских;
  • невосприимчивость ко многим дезинфицирующим средствам;
  • устойчивость к спиртам, кислотам и щелочи;
  • непосредственное токсическое воздействие на клетки, блокирующие воспаление в организме человека – лейкоциты;
  • изменчивость и способность к мутации, что обусловливает низкую эффективность определенных противотуберкулезных препаратов.

Корд-фактор представляет собой особое вещество, склеивающее МБТ между собой и обуславливающее тем самым их высокую концентрацию.

Крайне важным для недопущения эпидемии является своевременное выявление инфицированных пациентов. Для этого в настоящее время разработаны ежегодные профилактические осмотры во взрослых и детских коллективах. Задачей их считается определение наличия МБТ или уже развившегося тубзаболевания у конкретного человека.

Простой способ избавиться от ТУБЕРКУЛЕЗА!Елена вылечила туберкулез за 3 недели…Узнать подробности

Методы для раннего обнаружения инфицирования

К этой группе можно отнести туберкулинодиагностику и экспресс-тесты.

Первым этапом при проведении плановых осмотров является туберкулинодиагностика. Она является обязательной для детей, а также для взрослых при подозрении ни туберкулезную инфекцию. Лишь при положительных результатах проводится дальнейшее обследование с выделением МБТ из различных материалов.

Методы туберкулинодиагностики основаны на введении в кровоток специального лекарства, содержащего туберкулин (белок бактерии), или его аналогов. Препарат вводится внутрикожно. Через 72 часа оценивают результат.

Существует 2 метода туберкулинодиагностики:

Преимуществом их является возможность применения с 1 года. Это наиболее безопасные и простые способы для определения инфицирования МБТ у детей.

Диаскинтест является хорошим современным препаратом, однако он не может заменить пробу Манту. Часто их назначают одновременно, особенно при положительных первых исследованиях. Однако эти методы лишь позволяют врачам заподозрить инфицированность микобактерией человека, но не могут дать 100% гарантию.

Минусами туберкулинодиагностики являются:

  • частые ложноположительные результаты;
  • невозможность представить полную оценку клинической картины;
  • невозможность выявления конкретного возбудителя заболевания.

Однако туберкулинодиагностика является важным этапом для выявления МБТ при туберкулезе. Лишь после ее положительных результатов фтизиатр назначает последующее углубленное обследование.

Они являются удобными, быстрыми, в большинстве случаев достоверными, однако их стоимость и необходимость соответствующего оснащения учреждения делают их невостребованными. Из экспресс-методов применяют:

Для лечения и профилактики ТУБЕРКУЛЕЗА наши читатели успешно используют метод Елены Лариной. Внимательно изучив этот метод мы решили предложить его вашему вниманию.

  1. Использование специальной индикаторной пробирки с флуоресцентными веществами. После посева рост МБТ наблюдается в течение 4-10 суток.

    По наличию или отсутствию свечения определяют положительный или отрицательный результат.

    При этом выявляется наличие возбудителя в исходном материале, но не его количество или определенный вид.

  2. Газожидкостная хроматография основана на обнаружении специфических структур, свойственных только МБТ.
  3. Метод моноклональных антител основан на иммуноферментном анализе. Помогает определить вид возбудителя. Минусом является то, что можно обнаружить при этом только несколько форм МБТ.
  4. Применение ДНК-зондов.
  5. ПЦР.

4 и 5 методы позволяют выявить МБТ в исходном материале на 2-4 сутки. Это высокоэффективные способы, позволяющие выявить вид и форму возбудителя в самые ранние сроки.

Методы, позволяющие выделить конкретный возбудитель

С учетом развития современной науки и медицинской техники, фтизиатрия предлагает много способов для выявления МБТ.

Наиболее часто в клинической практике применяются:

  1. Бактериоскопия: прямая, люминесцентная, фазово-контрастная, флотационная.
  2. Бактериология.
  3. Биологические методы.

Сущность этих методов состоит в проведении лабораторных исследований, при которых из различных материалов выделяют МБТ. Для этого при легочном туберкулезе чаще всего используют мокроту. При внелегочном туберкулезе исследуют:

  • мочу;
  • плевральный выпот;
  • спинномозговую жидкость;
  • каловые массы;
  • выделения свищей- пунктаты;
  • промывные воды желудка.

Мокроту больной собирает с утра натощак в специальный контейнер. Если ее выделяется небольшое количество, то допустим сбор в течение дня. Часто у больных с туберкулезом кашля может и не быть. При этом проводят бронхоальвеолярный смыв или бронхоскопию. В последнем случае при проведении процедуры проводят бронхоальвеолярный лаваж с последующей биопсией «подозрительных» участков.

Промывание желудка и последующий сбор промывных вод часто назначают детям, не умеющим хорошо откашливать мокроту (особенно младшие возрастные группы). Это более щадящий метод, чем бронхоскопия.

Анализ мочи на микобактерии туберкулеза проводят при подозрении на инфицирование ими почек. Показанием для этого является обнаружение в осадке большого количества лейкоцитов (более 15 в каждом поле зрения).

Любой полученный от больного материал подлежит специальной подготовке мазков из него для дальнейшего исследования в зависимости от метода, назначенного фтизиатром. Анализы проводятся только в противотуберкулезных учреждениях специально обученным медицинским персоналом.

Бактериоскопический метод

Суть состоит в окрашивании специальными красителями препаратов, полученных из материала больного, с последующим рассмотрением их под микроскопом.

При прямой бактериоскопии, после окраски мазка по Цилю-Нильсену, врач его тщательно изучает. МБТ при этом имеют вид красных палочек, которые хорошо видны под микроскопом. Анализ проводится достаточно быстро, но он позволяет обнаружить возбудителя только при большом его количестве в исходном материале.

Делают бактериоскопию несколько дней подряд. Результаты записывают на определенные бланки. Указывается при этом вид (грамположительная палочка) и приблизительное количество.

Это позволяет в более короткие сроки рассмотреть большое количество препарата и точнее установить диагноз.

При проведении фазово-контрастной бактериоскопии врач может наблюдать МБТ и их различные формы в живом состоянии. Такой вид исследования является единственным способом выявления возбудителя, позволяющим его зафиксировать «вживую».

Это достигается путем использования специального фазово-контрастного оборудования. Такой метод исследования позволяет поставить правильный диагноз в большинстве случаев. Минусом является высокая стоимость медицинских устройств.

При любом проведенном виде бактериоскопии врач делает заключение, в котором указываются:

  • найденные формы МБТ;
  • вид;
  • среднее количество МБТ.

Второй показатель имеет наибольшее значение для оценки динамики проводимой терапии.

Бактериологический метод

Важное клиническое значение при выявлении МБТ имеет посев на специальные среды. При наличии палочки Коха в исходном материале будет происходить рост их колоний. Плюсом этого является возможность выявления возбудителя при малой его концентрации в начальной жидкости, из которой делаются посевы.

Неотъемлемой частью при проведении бактериологического метода, когда получены возбудители заболевания, является определение их чувствительности к противотуберкулезным препаратам.

При выдаче результатов врач обязан указать КОЕ (колониеобразующие единицы) в посеве. Их количество важно для интерпретации полученных данных. В заключении оно указывается следующим образом:

  1. Скудное, когда обнаруживается до 20 КОЕ.
  2. Умеренное, если их количество доходит до 100.
  3. Обильное, когда выявляется свыше 100 КОЕ.

При 1 варианте необходимо обязательное повторное исследование, потому что такое количество КОЕ не является достоверным для постановки диагноза.

При выявлении чувствительности к противотуберкулезным средствам в заключении указывается наиболее распространенный список лекарств, используемых фтизиатрами для лечения заболевания. Около названия каждого препарата латинскими буквами ставится – S или R. S обозначает чувствительность МБТ к данному лекарству, R – резистентность (устойчивость).

Один возбудитель может быть восприимчив как к одному, так и к нескольким препаратам, исходя из этого, фтизиатр назначает рациональную терапию.

Биологический метод исследования является, скорее, теоретическим. Заражение лабораторных животных различными видами МБТ с последующим их выделением и изучением носит научный характер и в реальной клинической практике практически не применяется.

При туберкулезе выявление МБТ происходит различными методами. Чаще всего в клинической практике используют несколько способов для обнаружения возбудителя, обязательно включающих посев на специальные среды. Такие методы являются абсолютно безопасными и широко применяются при диагностике туберкулеза у детей и взрослых.

Поделись в социальных сетях:

Источник: https://betbupehap.ru/health/2862-metody-vyjavlenija-mbt-pri-diagnostike-tuberkuleza.html

Ссылка на основную публикацию